Berapa Lama Setelah Transfeksi Ekspresi GFP (Dan Mengapa)?

Jawaban Tepat: 4 jam hingga 5 hari

Ketika beberapa asam nukleat secara artifisial diinduksi ke dalam sel sehat, prosesnya disebut transfeksi. Proses ini memungkinkan asam nukleat untuk melewati membran sel untuk masuk ke dalam sel. Ini digunakan dalam ilmu biologi untuk mempelajari berbagai proses seluler yang diubah lainnya yang dihasilkan dari pengenalan partikel RNA dan DNA ini.

GFP, di sisi lain, adalah singkatan dari protein fluorescent hijau. GFP digunakan sebagai molekul pelaporan untuk ekspresi gen dalam biologi karena memancarkan fluoresensi hijau di bawah cahaya biru. Ekspresi GFP dipelajari sehubungan dengan sel yang ditransfeksi. Ini juga digunakan untuk mempelajari struktur sel pada embrio dan janin.

Berapa Lama Setelah Transfeksi Ekspresi GFP?

Melalui proses transfeksi, menjadi mungkin untuk memasukkan asam nukleat ke dalam sel mamalia tanpa vektor virus. Metode transfer gen ini memungkinkan peneliti untuk mempelajari fungsi gen dan ekspresi protein di lingkungan seluler.

Secara umum, para peneliti mencatat bahwa dalam 90% sel yang diamati, Protein Fluorescent Hijau terlihat dalam waktu 4 jam setelah transfeksi. Namun, di beberapa sel, mungkin diperlukan waktu hingga 5 hari untuk menunjukkan efek transfeksi. Dengan kata lain, agar protein fluoresensi hijau terlihat di bawah mikroskop, diperlukan waktu hingga 5 hari.

Ekspresi GFP mungkin bergantung pada faktor-faktor seperti penggunaan agen transfeksi kimia atau fisik. Dalam kasus yang pertama, kami menemukan bahwa ekspresi GFP terjadi lebih cepat daripada nanti. Ini akan menyiratkan bahwa agen transfeksi kimia bekerja lebih cepat pada tingkat sel daripada agen fisik.

Atau, agen transfeksi fisik mungkin memerlukan beberapa saat untuk menunjukkan ekspresi GFP dalam sel mamalia. Mereka bekerja lebih lambat daripada agen transfeksi kimia aksi cepat. Selain itu, para peneliti juga telah menyatakan bahwa tahap siklus sel, ketika sel tertentu dipilih juga mempengaruhi waktu ketika ekspresi GFP terjadi di sel yang dipilih.

Sama pentingnya untuk dicatat bahwa penelitian di arena ini masih sedikit. Ini juga merupakan alasan utama untuk tidak adanya hasil yang sangat konklusif tentang masalah ini. Dengan demikian bijaksana untuk mengusulkan bahwa sebagian besar sel mamalia akan menunjukkan ekspresi GFP dalam waktu 4 hingga 6 jam setelah transfeksi.  

Kesimpulannya:

Mengapa Ekspresi GFP Butuh Waktu Lama Setelah Transfeksi?

Ekspresi GFP merupakan simbol dari fakta bahwa transfeksi telah berhasil dan struktur gen sekarang berubah. Agar hal ini terjadi, agen yang ditransfusikan harus diberikan waktu untuk memulai perubahan struktural. Dengan demikian, dibutuhkan beberapa waktu untuk terlihat di bawah mikroskop.

Ekspresi GFP mungkin cepat di beberapa sel setelah transfeksi karena jenis agen yang digunakan untuk menginduksi asam nukleat ke dalam sel mamalia. Jika vektor kimia digunakan, hasilnya akan selalu dipercepat. Seseorang kemudian dapat berharap untuk melihat ekspresi protein fluoresen hijau dalam beberapa jam setelah transfeksi.

Namun, jika agen fisik digunakan, ekspresi transfeksi melalui GFP akan memakan waktu lebih lama. Demikian pula, struktur sel juga dapat menunda proses beberapa hari. Sel-sel harus dibiarkan mencapai tingkat stabilitas sebelum mereka dapat diuji untuk protein fluoresen hijau di bawah mikroskop.

Imbibisi asam nukleat pasti memakan waktu lama karena seseorang mencoba mengubah komposisi kimia sel secara manual. Ini adalah perubahan struktural yang signifikan yang tidak dapat - dalam banyak kasus - disederhanakan dengan menggunakan katalis. Jadi, sebagai seorang ilmuwan, Anda harus memberi sel waktu untuk beradaptasi dan berubah dengan kecepatannya sendiri.

Oleh karena itu, sebaiknya menunggu hingga satu minggu untuk melihat apakah ekspresi GFP terlihat dalam kelompok sel. Karena sel yang berbeda bereaksi secara berbeda, perbedaan waktu dalam ekspresi gen hanya wajar dan diharapkan.

Kesimpulan

Transfeksi bisa menjadi hal yang sangat novel dan cara yang berguna untuk mengubah komposisi kimia sel dan ekspresi gen. Ini digunakan oleh para ilmuwan untuk mempelajari sel mamalia dan responsnya terhadap asam nukleat yang diinduksi.

Umumnya, kelompok sel cenderung menunjukkan sesi transfeksi yang sukses dalam waktu 4 sampai 6 jam dari proses. Ini diekspresikan melalui protein fluorescent hijau yang terlihat dalam sel di bawah mikroskop. Dalam beberapa kasus, sel mungkin membutuhkan waktu lebih lama untuk menunjukkan ekspresi gen yang berubah. Jangka waktu ini dapat diperpanjang hingga 5 hari dalam peristiwa langka seperti itu.  

Referensi

1. https://link.springer.com/article/10.1007/s004240050445
2. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0168010298001138