अभिकर्मक जीएफपी अभिव्यक्ति के कितने समय बाद (और क्यों)?

सटीक उत्तर: 4 घंटे से 5 दिन तक

जब कुछ न्यूक्लिक एसिड को कृत्रिम रूप से स्वस्थ कोशिकाओं में प्रेरित किया जाता है तो इस प्रक्रिया को अभिकर्मक कहा जाता है। यह प्रक्रिया न्यूक्लिक एसिड को कोशिका झिल्ली को बायपास करके कोशिका में प्रवेश करने की अनुमति देती है। इसका उपयोग जैविक विज्ञान में इन आरएनए और डीएनए कणों की शुरूआत के परिणामस्वरूप होने वाली विभिन्न अन्य परिवर्तित सेलुलर प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए किया जाता है।

दूसरी ओर, जीएफपी का मतलब हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन है। जीएफपी का उपयोग जीव विज्ञान में जीन अभिव्यक्ति के लिए एक रिपोर्टिंग अणु के रूप में किया जाता है क्योंकि यह नीली रोशनी के तहत हरे रंग की प्रतिदीप्ति उत्सर्जित करता है। ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाओं के संबंध में जीएफपी अभिव्यक्ति का अध्ययन किया जाता है। इसका उपयोग भ्रूण और भ्रूण में कोशिका संरचनाओं का अध्ययन करने के लिए भी किया जाता है।

अभिकर्मक जीएफपी अभिव्यक्ति के कितने समय बाद?

अभिकर्मक की प्रक्रिया के माध्यम से, वायरल वैक्टर के बिना स्तनधारी कोशिकाओं में न्यूक्लिक एसिड डालना संभव हो जाता है। यह जीन स्थानांतरण विधि शोधकर्ताओं को सेलुलर वातावरण में जीन फ़ंक्शन और प्रोटीन अभिव्यक्ति का अध्ययन करने की अनुमति देती है।

आम तौर पर, शोधकर्ता ध्यान देते हैं कि अवलोकन के तहत 90% कोशिकाओं में, ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन ट्रांसफ़ेक्शन के 4 घंटे के भीतर दिखाई देता है। हालाँकि, कुछ कोशिकाओं में ट्रांसफ़ेक्शन का प्रभाव दिखने में 5 दिन तक का समय लग सकता है। दूसरे शब्दों में, हरे प्रतिदीप्ति प्रोटीन को माइक्रोस्कोप के नीचे दिखाई देने में 5 दिन तक का समय लग सकता है।

जीएफपी अभिव्यक्ति रासायनिक या भौतिक ट्रांसफ़ेक्टिंग एजेंटों के उपयोग जैसे कारकों पर निर्भर हो सकती है। पूर्व के मामले में, हम पाते हैं कि जीएफपी अभिव्यक्ति देर से होने के बजाय जल्द ही होती है। इसका तात्पर्य यह होगा कि रासायनिक अभिकर्मक एजेंट भौतिक एजेंटों की तुलना में सेलुलर स्तर पर तेजी से काम करता है।

वैकल्पिक रूप से, भौतिक अभिकर्मक एजेंटों को स्तनधारी कोशिकाओं में जीएफपी अभिव्यक्ति दिखाने में कुछ समय लग सकता है। वे तीव्र क्रिया वाले रासायनिक अभिकर्मक एजेंटों की तुलना में धीमी गति से काम करते हैं। इसके अलावा, शोधकर्ताओं ने यह भी कहा है कि कोशिका चक्र चरण, जब एक विशेष कोशिका का चयन किया जाता है, उस समय को भी प्रभावित करता है जब चयनित कोशिका में जीएफपी अभिव्यक्ति होती है।

यह ध्यान रखना भी उतना ही महत्वपूर्ण है कि इस क्षेत्र में अनुसंधान बहुत कम रहा है। इस मुद्दे पर बेहद निर्णायक नतीजों के अभाव का यह भी एक प्रमुख कारण है। इस प्रकार यह प्रस्ताव करना समझदारी है कि अधिकांश स्तनधारी कोशिकाएं अभिकर्मक के 4 से 6 घंटे के भीतर जीएफपी अभिव्यक्ति दिखाएंगी।  

सारांश में:

ट्रांसफ़ेक्शन के बाद GFP अभिव्यक्ति में इतना समय क्यों लगता है?

जीएफपी अभिव्यक्ति इस तथ्य का प्रतीक है कि अभिकर्मक सफल रहा है और जीन संरचना अब बदल गई है। ऐसा होने के लिए, ट्रांसफ़ेक्ट एजेंट को संरचनात्मक परिवर्तन शुरू करने के लिए समय दिया जाना चाहिए। इस प्रकार, माइक्रोस्कोप के नीचे दिखाई देने में कुछ समय लगता है।

स्तनधारी कोशिकाओं में न्यूक्लिक एसिड को प्रेरित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले एजेंट के प्रकार के कारण ट्रांसफ़ेक्शन के बाद कुछ कोशिकाओं में जीएफपी की अभिव्यक्ति तेज़ हो सकती है। यदि एक रासायनिक वेक्टर का उपयोग किया जाता है, तो परिणाम हमेशा तेज होगा। अभिकर्मक के कुछ घंटों के भीतर हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति देखने की उम्मीद की जा सकती है।

हालाँकि, यदि भौतिक एजेंटों का उपयोग किया जाता है, तो GFP के माध्यम से अभिकर्मक अभिव्यक्ति में कुछ और समय लगेगा। इसी तरह, कोशिका संरचना भी प्रक्रिया में कुछ दिनों की देरी कर सकती है। माइक्रोस्कोप के तहत हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन का परीक्षण करने से पहले कोशिकाओं को स्थिरता के स्तर तक पहुंचने की अनुमति दी जानी चाहिए।

न्यूक्लिक एसिड के अवशोषण में कुछ समय लगना तय है क्योंकि कोई व्यक्ति कोशिका की रासायनिक संरचना को मैन्युअल रूप से बदलने की कोशिश कर रहा है। यह एक महत्वपूर्ण संरचनात्मक परिवर्तन है जिसे ज्यादातर मामलों में उत्प्रेरक के उपयोग से सुव्यवस्थित नहीं किया जा सकता है। इस प्रकार, एक वैज्ञानिक के रूप में, आपको कोशिकाओं को अपनी गति से अनुकूलन और परिवर्तन के लिए समय देना होगा।

इसलिए यह देखने के लिए एक सप्ताह तक इंतजार करना समझदारी है कि क्या GFP अभिव्यक्ति सेल क्लस्टर में दिखाई दे रही है। चूँकि अलग-अलग कोशिकाएँ अलग-अलग प्रतिक्रिया करती हैं, जीन अभिव्यक्ति में समय का अंतर स्वाभाविक और अपेक्षित है।

निष्कर्ष

अभिकर्मक बहुत हो सकता है उपन्यास और कोशिका की रासायनिक संरचना और जीन अभिव्यक्ति को बदलने का उपयोगी तरीका। इसका उपयोग वैज्ञानिकों द्वारा स्तनधारी कोशिकाओं और प्रेरित न्यूक्लिक एसिड के प्रति उनकी प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए किया जाता है।

आम तौर पर, सेल क्लस्टर प्रक्रिया के 4 से 6 घंटे के भीतर एक सफल ट्रांसफ़ेक्शन सत्र प्रदर्शित करते हैं। इसे हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन के माध्यम से व्यक्त किया जाता है जो माइक्रोस्कोप के नीचे कोशिकाओं में दिखाई देता है। बहुत कम मामलों में, कोशिकाओं को परिवर्तित जीन अभिव्यक्ति दिखाने में अधिक समय लग सकता है। ऐसी दुर्लभ घटनाओं में यह समयावधि 5 दिनों तक बढ़ सकती है।  

संदर्भ

1. https://link.springer.com/article/10.1007/s004240050445
2. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0168010298001138